بیان متفاوت میکرو RNA ها در بافت چربی چادرینه ای افراد مبتلا به دیابت بارداری
بافت چربی چادرینه¬ای، نقش مهمی در مقاومت به انسولین در دیابت بارداری (GDM) ایفا می‌کند؛ و مکانیزم های مولکولی مربوط به GDM، همچنان مبهم هستند. شواهد نشان می‌دهند که هورمون‌های مادری مانند استرادیول، موجب مقاومت به انسولین در GDM می‌شوند. در این مطالعه، الگوهای بیان متفاوت microRNAs (miRNAs) در بافتهای چربی افراد مبتلا به GDM و زنان باردار دارای تحمل گلوکز طبیعی، را با استفاده از تراشه‌های بیانیAFFX miRNA تعیین کردیم. با انجام real-time PCR کمّی مشخص شد که MiR-222 (یکی از 17 miRNAs شناسایی شده با بیان متفاوت)، در افراد مبتلا به GDMتنظیم مثبت معناداری دارد (P< 0.01)؛ و بیان آن کاملاً با سطح سرمی استرادیول مرتبط بود (P< 0.05). علاوه بر این، بیان miR-222 در سلولهای چربی 3T3-L1 با غلظت زیاد تحریک ß17-استرادیول بطور معناداری افزایش می‌یافت (P< 0.01)؛ درحالیکه بیان پروتئین گیرنده استروژن آلفا ((ER -α و پروتئین غشاگذر و حساس به انسولین حامل گلوکز 4 (GLUT4) (P< 0.01) به شدت کم می‌شد. علاوه بر این، با استفاده از آزمایش لوسیفراز مشخص شد که ERα، هدف مستقیم miR-222 در سلولهای چربی 3T3-L1 است. در نهایت، از انتقال الیگونوکلئوتیدهای آنتی¬سنسmiR-222 برای خاموش کردن miR-222 در سلولهای چربی 3T3-L1 استفاده شد. نتایج نشان داد که بیان ERα و GLUT4، انتقال انسولین تحریک شده بواسطه GLUT4 از سیتوپلاسم به سمت غشای سلولی، و جذب گلوکز در سلولهای چربی بالغ، به طور چشمگيری افزايش می‌یابند (P< 0.01). در نتیجه، miR-222 تنظیم کننده احتمالی بیان ERα مقاوم به انسولین القا شده با استروژن در افراد مبتلا به GDM است و می‌تواند بیومارکر کاندیدا و هدف درمانی GDM باشد. (اندوکرینولوژی 155: 1982-1990، 2014)
دیابت بارداری (GDM)، که بصورت عدم تحمل گلوکز شناسایی شده در طول دوران بارداری تعریف می‌شود، یکی از رایج‌ترین عوارض حاملگی است و حدود 1٪ -14٪ تمام زنان باردار را تحت تأثیر قرار می‌دهد (1). زنان مبتلا به GDM، خطر بالایی برای ابتلا به سایر عوارض حاملگی، از جمله فشار خون بالای بارداری، ماکروزومیا (داشتن جنین بزرگ) و دیابت کتواسیدوز، دارند؛ و به احتمال بسیار زیاد پس از دوران بارداری از دیابت نوع 2 رنج خواهند برد. فرزندان مادران مبتلا به GDM در معرض ریسک بالاتری برای ابتلا به بیماری‌های متابولیکی مانند دیابت، چاقی، و بیماری قلبی عروقی، در دوران بزرگسالان خود هستند (2، 3).
Omental adipose tissue plays a central role in insulin resistance in gestational diabetes mellitus (GDM), and themolecularmechanisms leading to GDM remains vague. Evidence demonstrates that maternal hormones, such as estradiol, contribute to insulin resistance in GDM. In this study we determined the differential expression patterns of microRNAs (miRNAs) in omental adipose tissues from GDM patients and pregnant women with normal glucose tolerance using AFFX miRNA expression chips. MiR-222, 1 of 17 identified differentially expressed miRNAs, was found to be significantly up-regulated in GDM by quantitative real-time PCR (P .01), and its expression was closely related with serum estradiol level (P .05). Furthermore, miR-222 expression was significantly increased in 3T3-L1 adipocytes with a high concentration of 17-estradiol stimulation (P .01), whereas the expressions of estrogen receptor (ER)- protein and insulin-sensitive membrane transporter glucose transporter 4 (GLUT4) protein (P .01) were markedly reduced. In addition, ER was shown to be a direct target of miR-222 in 3T3-L1 adipocytes by using the luciferase assay. Finally, antisense oligonucleotides of miR-222 transfection was used to silence miR-222 in 3T3-L1 adipocytes. The results showed that the expressions of ER and GLUT4, the insulin-stimulated translocation of GLUT4 from the cytoplasm to the cell membrane and glucose uptake in mature adipocytes were dramatically increased (P .01). In conclusion, miR-222 is a potential regulator of ER expression in estrogen-induced insulin resistance in GDM and might be a candidate biomarker and therapeutic target for GDM.
Gestational diabetes mellitus (GDM), defined as glucose intolerance that is first recognized during pregnancy, is one of the most common pregnancy complications and affects approximately 1%-14% of all pregnancies (1). Women with GDM have a high risk of other pregnancy complications, including gestational hypertension, macrosomia, and diabetic ketoacidosis, and are more likely to suffer from type 2 diabetes after the pregnancy. The offspring of GDM mothers are at a higher risk of metabolic diseases, such as diabetes, obesity, and cardiovascular disease, in their adult lives (2, 3).
(جهت بزرگ نمایی روی عکس کلیک نمایید)
مواد و روش‌ها
بیانیه اخلاقی
افراد و نمونه‌ها
استخراج RNA کل از بافت چربی چادرینه¬ای
پروفایل‌های بیان miRNA
انجامqRT-PCR مولکول miR-222 بدست آمده از نمونه‌های بافت چربی چادرینه¬ای
کشت سلولهای چربی 3T3-L1 موش
تشخیص استرادیول سرمی
سنتز الیگونوکلئوتیدهای آنتی¬سنس mmu-miR-222
ترانسفوزیون سلولهای چربی 3T3-L1
آزمونهای بیان گیرنده لوسیفراز با استفاده از ژن‌های وحشی و جهش یافته ER –‘3 UTR موجود در سلولهای چربی3T3-L1 آلوده شده با miR-222 یا miR-SCR
ایمینوبلاتینگ گیرنده استروژن آلفا و GLUT4
آزمونهای جذب گلوکز
پردازش داده‌ها و تجزیه و تحلیل آماری
نتایج
ویژگی‌های بالینی جمعیت مورد مطالعه
بیان متفاوت miRNAs موجود در بافت چربی چادرینه¬ای در زنان باردار مبتلا به GDM و زنان باردار طبیعی
تنظیم miR-222 در بافت چربی چادرینه¬ای زنان مبتلا بهGDM ، مثبت است و ارتباط منفی با بیان پروتئین گیرنده استروژن الفا و پروتئین GLUT4 دارد.
سطح استرادیول سرمی در گروه مبتلا به GDM و گروه کنترل NGT
غلظت‌های بالای استراديول موجود در بافتهای چربی، بیان miR-222 را افزایش می‌دهد و از بیان گیرنده استروژن الفا و GLUTمی‌کاهد.
بیان پروتئین گیرنده استروژن الفا، موجب تنظیم مثبت سلولهای چربی 3T3-L1 تمایز یافته و خاموش شده با miR-222 می‌گردد.
بیان ژن لوسیفراز با الل وحشی و جهش یافته ERα 3 –UTR نوع نوع وحشی در سلولهای 3T3-L1 آلوده شده با miR-222 یا miR-SCR
اثر miR-222 بر جذب پایه‌ای گلوکز و جذب گلوکز القا شده با انسولین در سلولهای جربی 3T3-L1
اثرات الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس miR-222 بر جابجایی پایه‌ای GLUT4 و جابجایی القا شده آن با انسولین
بحث
منابع
Materials and Methods
Ethics statement
Subjects and samples
Omental adipose tissue total RNA extraction
miRNA expression profiles
qRT-PCR of miR-222 in omental adipose tissue samples
Detection of serum estradiol
Synthesis of antisense oligonucleotides of mmu-miR-222
Transfection of 3T3-L1 adipocytes
Luciferase reporter expression assays using luciferase genes with mutated or wild-type ER-3 UTR in 3T3-L1cells cotransfected with miR-222 or miR-SCR
Immunoblotting of ER and GLUT4
Glucose uptake assays
Data processing and statistical analysis
Results
Clinical characteristics of the study population
Differential expression of miRNAs in omental adipose tissue between GDM patients and normal pregnant women
miR-222 is up-regulated in GDM omental adipose tissue and negatively correlated with the expression of ER protein and GLUT4 protein
Serum estradiol levels in the GDM group and the NGT controls
High estradiol concentrations in adipocytes increase miR-222 expression and decrease ER and GLUT4 expression
ER protein expression is up-regulated in miR-222- silenced differentiated 3T3-L1 adipocytes
Expression of luciferase gene with mutated or wild-type ER 3-UTR in 3T3-L1 cells cotransfected with miR-222 or miR-SCR
Effect of miR-222 on basal and insulin-stimulated glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes
Effects of miR-222 ASO on basal and insulinstimulated GLUT4 translocation
Discussion
References
- ترجمه فارسی مقاله با فرمت ورد (word) با قابلیت ویرایش، بدون آرم سایت ای ترجمه
- ترجمه فارسی مقاله با فرمت pdf، بدون آرم سایت ای ترجمه