روش جداسازی سریع باسیل خاک و غربالگری فعالیت رفع حد نصاب در آن ها
چکیده
در باکتری های گرم منفی، لاکتون های N- آسیل هموسرین (AHL) واسطه ی سنجش حد نصاب برای تنظیم عملکردهای مختلف بیولوژیکی، از جمله تولید عوامل بیماری زا هستند. رفع حد نصاب به وقفه در سنجش از حد نصاب اشاره داشته و جذاب ترین راه برای کاهش مولکول های AHL است. با هدف جداسازی باکتری های خاک که از طریق غیر فعال کردن AHL، قادر به مسدود کردن سنجش حد نصاب هستند، یک روش غنی سازی جدید طراحی شده است. باکتری های تجزیه کننده ی AHL از یک نمونه خاک از مالزی جدا شدند. 12 ایزوله حاوی ژن همولوگ aiiA با استفاده از روش PCR شناسایی شده و سه استرین برای تجزیه و تحلیل های بعدی انتخاب شد. روش غیر فعال کردن AHL نشان داد که این سه ایزوله در شرایط آزمایشگاهی به سرعت 3-oxo-C6-H5L را تخریب می کنند. فنوتیپ های مرفولوژیکی و تجزیه و تحلیل توالی DNA ریبوزومی 16s نشان داد که این ایزوله ها متعلق به جنس باسیلوس هستند. داده های ما پیشنهاد می کنند که باکتری های باسیلوس خاک می-توانند با استفاده از روش انتخابی جداسازی شوند و تعدادی از باسیلوس های خاک در خاک مالزی فعالیت مهارکنندگی حدنصاب را نشان دادند.
مقدمه
در باکتری های گرم منفی، ارتباطات سلول به سلول (سنجش حد نصاب) از طریق تولید و درک مولکول سیگنال-دهی به نام لاکتون های N- آسیل هموسرین (AHL) به دست می آید. AHL ها از نظر اندازه و میزان اشباع زنجیره آسیل (4 تا 29 کربن، حضور یا عدم حضور یک پیوند دوگانه) و جانشینی در موقعیت 3" زنجیره های جانبی N-آسیل آن ها (بدون جانشینی، کتو یا هیدروکسی، برای مرور، Chhabra et al., 2005 را مشاهده کنید) متفاوت هستند. مسلما راحت ترین راه برای تشخیص AHL ها، استفاده از یک حسگر بر اساس مقررات وابسته به AHL از رنگدانه بنفش ویولاسئین از طریق یک جهش Chromobacterium violaceum (CV026) است. این جهش قادر به ساخت AHL ها نیست اما به حضور آن ها توسط سنتز ویولاسئین پاسخ می دهد (McClean et al., 1997).
Abstract
In Gram-negative bacteria, quorum sensing is mediated by N-acylhomoserine lactones (AHL) to regulate different biological functions, including production of virulence factors. Quorum quenching refers to the interruption of quorum sensing, and the most attractive way is to degrade the AHL molecules. With the aim of isolating soil bacteria capable of blocking quorum sensing by inactivating AHL, a novel enrichment method has been designed. Bacteria degrading AHL were isolated from a Malaysian soil sample. We identified twelve isolates which possessed an aiiA homologue gene by using PCR approach and three strains were selected for further analysis. AHL-inactivation assay showed that these three isolates rapidly degraded synthetic 3-oxo-C6-HSL in vitro. Morphological phenotypes and 16S ribosomal DNA sequence analysis indicated that these isolates fell into the genus of Bacillus. Our data suggest that soil Bacillus spp. can be isolated using the selection method and a number of soil bacilli in Malaysian soil exhibited quorum quenching activity .
INTRODUCTION
In Gram negative bacteria cell-to-cell communication (quorum sensing) is achieved via the production and sensing of signalling molecules called N-acylhomoserine lactones (AHLs). AHLs differ in the length and degree of saturation of the acyl chain (4 to 18 carbons; presence or absence of a double bond) and substituent at the 3-position of their Nacyl side chains (no substituent, keto or hydroxy; for review see Chhabra et al., 2005). Arguably the most convenient way to detect AHLs is using a biosensor based on the AHLdependent regulation of the purple pigment violacein by a mutant of Chromobacterium violaceum (CV026). This mutant is unable to make AHLs but responds to their presence by synthesising violacein (McClean et al., 1997).
چکیده
مقدمه
مواد و روش ها
باکتری ها، محیط های رشد و شرایط کشت
پردازش نمونه خاک و جداسازی باسیل خاک
تکثیر PCR ژن همولوگ aiiA و ژن J 6S rDNA
تجزیه و تحلیل توالی نوکلئوتید J 6S rDNA
آزمایش غیرفعال شدن کل سلول AHL
نتایج
جداسازی باکتری های خاک و تشخیص ژن همولوگ aiiA
شناسایی مولکولی ایزوله های باکتریایی خاک
آزمایش غیر فعال شدن کل سلول AHL
بحث
Abstract
INTRODUCTION
MATERIALS AND METHODS
Bacterial strains, growth media and culture conditions
Soil sample processing and isolation of soil bacilli
PCR amplification of aiiA homologue gene and 16S rDNA gene
16S rDNA nucleotide sequence analysis
Whole-cell AHL inactivation assay
RESULTS
Isolation of soil bacteria and detection of aiiA homologue gene
Molecular identification of soil bacterial isolates
Whole-cell AHL inactivation assay
DISCUSSION
- ترجمه فارسی مقاله با فرمت ورد (word) با قابلیت ویرایش، بدون آرم سایت ای ترجمه
- ترجمه فارسی مقاله با فرمت pdf، بدون آرم سایت ای ترجمه