بیان افتراقی همودامین انسانی TGIFLX در لاین های سلولی تومور مغزی
چکیده
گلیوبلاستوما رایج ترین و کشنده ترین سرطان مغز اولیه است. تهاجم این بیماری بسیار به صورت موضعی بوده، به ندرت متاستاز و در برابر درمان های فعلی مقاوم است. اطلاعات کمی در مورد زیست شناسی مولکولی گلیوبلاستومای چندشکلی (GBM) از نظر شروع و پیشرفت آن وجود دارد. تا کنون، چندین مکانیسم مولکولی پیشنهاد شده است که بر گسترش GBM دلالت دارد. عوامل رونویسی همودامین (HD ) نقش اساسی در بیان اطلاعات ژنومی در همه یوکاریوت ها دارد. ژن الگوساز TGIFX در ابتدا در بیضه انسان بالغ کشف شد. مطالعات قبلی ما نقش TGIFLX را در سرطان پروستات و آزواسپرمی نشان دادند، اگر چه مکانیسم مولکولی عمل TGIFLX ناشناخته است. علاوه بر این، بررسی ها نشان دادند که پروتئین HD در گسترش طبیعی و غیر طبیعی مغز درگیر است. الگوی بیان TGIFLX در لاین های سلولی مختلف تومور مغزی انسان از جمله U87MG، Al 72، Daoy و 1321Nl مورد بررسی قرار گرفت. جالب توجه است که real time RT-PCR و وسترن بلات سطح بالایی از بیان TGIFLX را در سلول های Al 72 نشان دادند، در صورتی که در سایر لاین های سلولی مشاهده نشد. پس از آن کل توالی کدکننده ی ژن TGIFLX به ناقل pEGFP-N l ، که ناقل بیان یوکاریوتی کدکننده ی eGFP است، کلون شده و به لاین سلولی U-87 MG ترنسفکت شد. بیان TGIFLX-GFP توسط real time RT-PCR و تجزیه و تحلیل میکروسکوپ UV تایید شد. پروتئین فیوژن TGIFLXGFP، پس از انتقال به سلول های U87، طور عمده در هسته یافت شد. این اولین گزارش برای تعیین استقرار TGIFLX در هسته و ارزیابی سطح بیان آن بین لاین های سلولی مختلف تومور مغزی است. اطلاعات ما همچنین پیشنهاد داد که اختلال در نظم ژن TGIFLX می تواند در پاتوژنز برخی از تومورهای مغزی انسان مشارکت داشته باشد.
مقدمه
گلیوبلاستومای چندشکلی ( GBM) یک نوع تومور با سرعت رشد بالا است که رایج ترین و کشنده ترین سرطان مغزی اولیه در افراد بالغ به شمار می رود (1-4). تهاجم این تومور نادر متاستازی به صورت موضعی بوده (5)، به بافت مغز گسترش یافته و در سلول های خارج از حاشیه برش درمانی قرار می گیرد (6). در یک مطالعه گزارش شد که در سال 2010 تومورهای مغزی در بیش از 22000 آمریکایی تخمین زده شد (7). با وجود اینکه پیشنهاد شده است که چندین مسیر ژنتیکی و سلولی در GBM نقش دارند (4،8-13)، هنوز هم اطلاعات کمی در مورد زیست شناسی رشد گلیوبلاستوما وجود دارد. ثابت شده است که روش های ژنتیک مولکولی مختلف از جمله ریزآرایه های DNA در شناسایی ژن های دخیل در شکل گیری تومور مغزی مفید هستند (13-15). پذیرفته شده است که درک مکانیسم مولکولی درگیر در ایجاد تومور، به نوبه خود، منجر به کشف استراتژی های درمانی جدید بر اساس زیست شناسی اختصاصی تومور می شود (6،14،16،17).
Abstract
Glioblastoma is the most common and the most lethal primary brain cancer. This malignancy is highly locally invasive, rarely metastatic and resistant to current therapies. Little is known about the distinct molecular biology of glioblastoma multiforme (GBM) in terms of initiation and progression. So far, several molecular mechanisms have been suggested to implicate in GBM development. Homeodomain (HD) transcription factors play central roles in the expression of genomic information in all known eukaryotes. The TGIFX homeobox gene was originally discovered in human adult testes. Our previous study showed implications of TGIFLX in prostate cancer and azoospermia, although the molecular mechanism by which TGIFLX acts is unknown. Moreover, studies reported that HD proteins are involved in normal and abnormal brain developments. We examined the expression pattern of TGIFLX in different human brain tumor cell lines including U87MG, A172, Daoy and 1321N1. Interestingly, real time RT-PCR and western blot analysis revealed a high level of TGIFLX expression in A172 cells but not in the other cell lines. We subsequently cloned the entire coding sequence of TGIFLX gene into the pEGFP-N1 vector, eukaryotic expression vector encoding eGFP, and transfected into the U-87 MG cell line. The TGIFLX-GFP expression was confirmed by real time RT-PCR and UV-microscopic analysis. Upon transfection into U87 cells, fusion protein TGIFLXGFP was found to locate mainly in the nucleus. This is the first report to determine the nuclear localization of TGIFLX and evaluation of its expression level between different brain tumor cell lines. Our data also suggest that TGIFLX gene dysregulation could be involved in the pathogenesis of some human brain tumors.
Introduction
Glioblastoma multiforme (GBM) is a fast-growing type of tumor that is the most common and most lethal primary brain malignancy in adults (1-4). This rare metastatic tumor is highly locally invasive (5) spreading into the brain tissue and placing cells outside the margin of therapeutic resection (6). A study reported that more than 22,000 Americans were estimated to diagnose with brain tumors in 2010 (7). Despite several genetic and cellular pathways have been suggested to implicate in GBM (4,8-13), still little is known about the distinct biology of glioblastoma development. Various molecular genetic approaches such as DNA microarray have proven to be very useful in identification of genes in brain tumor formation (13-15). It has been accepted that understanding of the molecular mechanism involved in tumorigenesis, in turn, would lead to the discovery of new therapeutic strategies based on particular tumor biology (6,14,16,17).
چکیده
مقدمه
مواد و روش ها
کشت سلولی
استخراج RNA کل و سنتز cDNA
تجزیه و تحلیل سطح TGIFLX mRNA توسط real-time RT PCR
ساختار ناقل pTGIFLX-EGFP-Nl و استقرار لاین سلولی SW48 بیان کننده ی TGIFLX
وسترن بلات
تجزیه و تحلیل آماری
نتایج
بیان TGIFLX در لاین های سلولی تومور مغزی
توزیع درون سلولی پروتئین های فیوژن GFP-TGIFLX
بحث
Abstract
Introduction
Materials and Methods
Total RNA extraction and cDNA synthesis
Analysis of TGIFLX mRNA levels by real-time RTPCR
Construction of pTGIFLX-EGFP-N1 vector and Establishment of SW48 cell line stably expressing TGIFLX
Western blotting
Statistical analysis
Results
TGIFLX expression in brain tumor cell lines
Subcellular distribution of GFP-TGIFLX fusion proteins
Discussion
- ترجمه فارسی مقاله با فرمت ورد (word) با قابلیت ویرایش، بدون آرم سایت ای ترجمه
- ترجمه فارسی مقاله با فرمت pdf، بدون آرم سایت ای ترجمه